Mumps virus genotypes identified during disease outbreaks in the state of São Paulo, Brazil: 2011-2016 / Genótipos dos vírus da caxumba identificados durantesurtos da doença no estado de São Paulo, Brasil: 2011 - 2016

In São Paulo the mumps virus (MuV) outbreaks have been increasing from In São Paulo the mumps virus (MuV) outbreaks have been increasing from 2011 to nowadays. MuV epidemiological surveillance has been improving by using the polymerase chain reaction in real time (rRT-PCR) in addition to the specific IgM antibody (IgM-Ab) detection; in some cases,genome sequencing studies were performed. Increased virus transmission and recent outbreakshave raised interest on MuV genotyping, as a means to understand the transmission pathways andto identify the vaccine-associated cases. From January 2011 to August 2016, MuV infection was analyzed at Institute Adolfo Lutz. A total of 232 (77.33 %) throat wash samples showed positivity to mumps genome, and 68 (22.66 %) were negative when analyzed by rRT-PCR. Among 15 samples for molecular analysis, 10 serum samples from respective patients were also available for detecting anti-MuV IgM-Ab; and from these, four (40%) samples were seropositive. Vaccination statuswas available only for patients from Cedral and Araraquara. Phylogenetic analysis revealed the circulation of the following mumps virus genotypes in the investigated periods: 2011(M), 2012, and 2013 (K); 2014 (N); 2015 (G, K, and N); 2016 (G). Knowledge on MuV molecular epidemiology in São Paulo-Brazil could contribute to the surveillance and epidemiological program in Brazil, and globally as well.

No estado de São Paulo têm ocorrido surtos de caxumba desde 2011. O diagnóstico laboratorialtem sido realizado no Instituto Adolfo Lutz utilizando-se a técnica de identificação de material genético viral por meio de reação de cadeia de polimerase-em tempo real (rRT-PCR) e peladetecção de anticorpos IgM (Ac-IgM) específicos circulantes. Os recentes surtos de caxumbatêm aumentado o interesse em investigar os genótipos dos vírus prevalentes para identificaros casos associadas à vacina. De janeiro de 2011 a agosto de 2016, 300 amostras de lavadosda orofaringe coletadas de pacientes suspeitos de infecção foram analisadas. O material genéticoviral específico foi detectado em 232 (77,33 %) amostras e 68 (22,66 %) foram negativas.Das 10 amostras analisadas pelo teste sorológico, quatro (40 %) demonstraram positividadepara Ac-IgM específicos anti-vírus da caxumba e seis foram negativas. Somente os municípios Cedral e Araraquara forneceram os dados referentes à vacinação. Análise filogenética mostroua circulação dos seguintes genótipos do vírus da caxumba no período investigado: 2011 (M),2012 e 2013 (K); 2014 (N); 2015 (GKN); 2016 (G). A vigilância virológica é mundialmente imprescindível, para identificar a diversidade e a distribuição dos diferentes genótipos, com vistasà composição de vacinas específicas.

Mumps virus genotypes identified during disease outbreaks in the state of São Paulo, Brazil: 2011 – 2016 / Genótipos dos vírus da caxumba identificados durante surtos da doença no estado de São Paulo, Brasil: 2011 - 2016

In São Paulo the mumps virus (MuV) outbreaks have been increasing from 2011 to nowadays. MuV epidemiological surveillance has been improving by using the polymerase chain reaction in real time (rRT-PCR) in addition to the specific IgM antibody (IgM-Ab) detection; in some cases, genome sequencing studies were performed. Increased virus transmission and recent outbreaks have raised interest on MuV genotyping, as a means to understand the transmission pathways and to identify the vaccine-associated cases. From January 2011 to August 2016, MuV infection was analyzed at Institute Adolfo Lutz. A total of 232 (77.33 %) throat wash samples showed positivity to mumps genome, and 68 (22.66 %) were negative when analyzed by rRT-PCR. Among 15 samples for molecular analysis, 10 serum samples from respective patients were also available for detecting anti-MuV IgM-Ab; and from these, four (40%) samples were seropositive. Vaccination status was available only for patients from Cedral and Araraquara. Phylogenetic analysis revealed the circulation of the following mumps virus genotypes in the investigated periods: 2011(M), 2012, and 2013 (K); 2014 (N); 2015 (G, K, and N); 2016 (G). Knowledge on MuV molecular epidemiology in São Paulo-Brazil could contribute to the surveillance and epidemiological program in Brazil, and globally as well.

No estado de São Paulo têm ocorrido surtos de caxumba desde 2011. O diagnóstico laboratorial tem sido realizado no Instituto Adolfo Lutz utilizando-se a técnica de identificação de material genético viral por meio de reação de cadeia de polimerase-em tempo real (rRT-PCR) e pela detecção de anticorpos IgM (Ac-IgM) específicos circulantes. Os recentes surtos de caxumba têm aumentado o interesse em investigar os genótipos dos vírus prevalentes para identificar os casos associadas à vacina. De janeiro de 2011 a agosto de 2016, 300 amostras de lavados da orofaringe coletadas de pacientes suspeitos de infecção foram analisadas. O material genético viral específico foi detectado em 232 (77,33 %) amostras e 68 (22,66 %) foram negativas. Das 10 amostras analisadas pelo teste sorológico, quatro (40 %) demonstraram positividade para Ac-IgM específicos anti-vírus da caxumba e seis foram negativas. Somente os municípios Cedral e Araraquara forneceram os dados referentes à vacinação. Análise filogenética mostrou a circulação dos seguintes genótipos do vírus da caxumba no período investigado: 2011 (M), 2012 e 2013 (K); 2014 (N); 2015 (GKN); 2016 (G). A vigilância virológica é mundialmente imprescindível, para identificar a diversidade e a distribuição dos diferentes genótipos, com vistas à composição de vacinas específicas.

Isolation of the wild-type rubella virus in rabbit kidney cell line RC-IAL

O presente estudo descreve o isolamento e o crescimento do vírus selvagem da rubéola na linhagem celular RC-IAL. A susceptibilidade da linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) para o vírus-padrão da rubéola RA 27/3 foi anteriormente descrito por nós(4). Amostras de 20 pacientes com suspeita de infecção por rubéola foram testadas por sorologia, isolamento viral e nested PCR. Os soros foram testados por Elisa para detecção de anticorpos reagentes para rubéola e nested PCR para detectar o RNA viral. As amostras clínicas de sangue, urina, fragmento de placenta e líquido amniótico foram inoculadas nas linhagens celulares RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) e Sirc (córnea de coelho). O vírus da rubéola foi isolado das amostras clínicas de quatorze pacientes. O efeito citopático (ECP) foi examinado por microscopia de contraste de fase, e o RNA do vírus da rubéola foi amplificado por nested PCR. Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um excelente substrato para isolamento do vírus da rubéola. Estes dados são importantes, pois poucas linhagens descritas na literatura apresentam efeito citopático que possibilite seu uso para isolar o vírus da rubéola de material clínico.

Rash after measles vaccination: laboratory analysis of cases reported in Säo Paulo, Brazil

OBJETIVO: O diagnóstico diferencial de doenças exantemáticas causadas por vírus é geralmente difícil, e equívocos näo säo raros, especialmente depois da introduçäo da vacina contra o sarampo e a rubéola. Um estudo laboratorial foi conduzido com o objetivo de estabelecer o diagnóstico etiológico de casos de exantema em crianças que receberam a vacina contra o sarampo. MÉTODOS: Soros de casos de exantema em crianças que receberam vacina contra o sarampo, em 1999, foram analisados para anticorpos IgM contra os vírus do sarampo, da rubéola e do parvovírus humano B19 (HPV B19), por técnicas comerciais de Elisa, e o herpes vírus humano tipo 6 (HHV 6), por técnica comercial de imunofluorecência. A viremia para cada um desses vírus foi testada pela reaçäo em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Foram notificados, em 1999, 17 casos de crianças com exantema pós-vacinal. A idade das crianças era de nove a 12 meses (mediana, dez meses). Uma amostra de sangue colhida para investigaçäo laboratorial foi obtida para cada criança. O tempo decorrido entre a aplicaçäo da vacina e o aparecimento do exantema variou de um a 60 dias. Os resultados da sorologia das 17 crianças sugeriram o seguinte diagnóstico etiológico para o exantema: 17,6por cento (três em 17) infecçäo pelo HPV B19; 76,5por cento (13 em 17) infecçäo pelo HHV 6; 5,9por cento (um em 17) exantema originado pela vacina do sarampo. CONCLUSAO: Os resultados indicaram que a infecçäo pelo HPV B19 ou pelo HHV 6 pode ser diagnosticada como sarampo de origem vacinal. Portanto, é fundamental incluir esses vírus no diagnóstico laboratorial para corretamente apontar a etiologia das doenças exantemáticas, evitando, assim, atribuir à vacina do sarampo efeito colateral

Detection of rubella virus RNA in serum samples by RT-PCR assay / Detecçäo do RNA do vírus da rúbeola no soro através de RT-PCR

Em geral, a reaçäo de polimerizaçäo em cadeia precedida de retrotranscriçäo (RT-PCR) tem demonstrado ser um método rápido e sensível para detectar o RNA do vírus rubéola em uma variedade de materiais clínicos. A reaçäo de RT-PCR foi utilizada para detectar o vírus no soro e confirmar o teste sorológico em indivíduos infectados com vírus da rubéola. Para este estudo, uma fita simples de RNA viral, extraída do soro, foi usada como fita-molde para para a transcriçäo reversa, seguida da amplificaçäo com dois diferentes pares de olinucleotídeos iniciadores e de uma segunda amplificaçäo com outros pares de oligonucleotídeos. O método do RT-PCR foi utilizado para se examinar amostras de soro de nove pacientes com sorologia confirmada para o vírus da rubéola. Quatro soros testados por RT-PCR tiveram como resultado infecçäo pelo vírus da rubéola. Os soros foram primeiramente analisados utilizando-se de 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisados utilizando-se 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisado utilizando-se volumes menores de soro, e somente uma amostra foi amplificada a partir da extraçäo do RNA viral de 300µl. Neste estudo, a estratégia de se utilizar soro no desenvolvimento do teste RT-PCR sugere ser uma alternativa a mais para o diagnóstico da infecçäo pelo vírus da rubéola